電子顕微鏡観察


 病理医は時には電子顕微鏡を使用して,細胞の超微構造を観察するこ
ともあります.電子顕微鏡は光線の代わりに電子線を使用し,真空状態
の中で標本を観察します.電子顕微鏡の試料作成はパラフィン標本と同
様,固定→包埋→薄切→染色の過程を経ますが,それぞれの方法が異な
ります.私の研究室では固定にはエリザベス固定液(1%グルタールアル
デヒド,4%ホルマリン,0.1Mリン酸緩衝液)を用いて,標本採取後,迅
速に固定します.固定した電顕試料は,アルコールで脱水後,パラフィ
ンではなくエポキシ樹脂で包埋します.エポキシ樹脂はパラフィンより
ずっと固いものです.この固い樹脂で試料を固めることで,0.05〜0.1μm
といった超薄切片の作成が可能となるのです.電顕観察をするための超
薄切片を作成する前に,もう少し厚めの切片を作成し,トルイジンブル
ーで染色後,光学顕微鏡で標本を観察します.これは標本内に狙った病
変があることを光学顕微鏡で確認した後で,電顕用の標本を作製するか
らです.電顕用の超薄切片も,染色しなくては電顕で観察できません.
超薄切片を金属メッシュに貼り付けた後,酢酸ウラニル,鉛を用いた電
子染色を行い,電子顕微鏡で観察します.電子顕微鏡は,暗い部屋で観
察します.これは観察に蛍光板を用いるので,明るい部屋では観察でき
ないからです.しかし,この蛍光板による観察では,あまり画像解像度
が良くないため,自分の観察したい場所をある程度大まかに特定し,写
真撮影後,詳細な構造を観察します.引き伸ばすことで,観察していた
拡大より,数倍大きくして電顕像を観察することができます.このよう
にして,超微構造の観察を行います.



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